鹅LEPR基因克隆、表达、调控分析
瘦素受体基因(leptin recptor,LEPR)属于I类细胞因子超家族,其在哺乳动物和鱼类中都有广泛报道;禽类中,在鸡、火鸡和鸭中有报道。目前,有关鹅的LEPR基因的相关信息(序列、表达、调控信息)还是未知的。在对禽类脂肪性状研究中,主要以鸡作为模式生物,研究表明,一些在哺乳动物脂肪分化过程中发挥重要作用的基因(如PPARγ、LPL、FAS等)也参与了鸡的脂肪细胞分化,而且游离脂肪酸(例如油酸)对于激活分化相关基因是必需的。
为进一步研究游离脂肪酸是否在鹅的脂肪细胞分化过程中也具有相似的功能、以及LEPR基因在脂肪细胞分化过程中是否发挥作用,试验采用RT-PCR和RACE的方法克隆鹅LEPR基因cDNA序列,并对其结构进行分析;采用荧光定量PCR方法对LEPR基因在鹅各组织中的表达情况进行分析;检测油酸对脂肪细胞中LEPR基因的表达调控;以及LEPR基因被干扰后对脂肪细胞分化相关基因表达量的影响。
本研究获得鹅LEPR基因全长cDNA序列,所获得的LEPR基因编码拥有1156个氨基酸残基的多肽,其与鸭的LEPR基因在氨基酸水平上有90%的同源性,与鸡和火鸡有75%的同源性;荧光定量PCR结果显示,鹅LEPR基因主要在脑中表达,油酸可以上调脂肪细胞中LEPR的mRNA水平;此外,油酸还可以诱导脂肪分化相关基因(PPARγ、LPL、FAS)的表达,但在LEPR基因被敲除的脂肪细胞中,PPARγ、LPL、FAS基因对油酸的敏感性降低,细胞分化受到抑制,揭示LEPR基因在鹅脂肪细胞分化过程中具有重要作用。


