小鹅瘟病毒VP3基因疫苗可诱导小鼠和鹅产生特异性中和抗体
程安春 教授
小鹅瘟（Gosling Plague，GP）是由鹅细小病毒（Goose Parvovirus，GPV）引起的一种严重危害养鹅业的高度接触性传染病，主要侵害20日龄以内雏鹅和雏番鸭。目前免疫预防GP主要是使用弱毒疫苗免疫种鹅使下一代雏鹅获得被动免疫保护，或直接对雏鹅注射特异血清提供被动免疫保护，这种手段无法区别GPV自然感染还是人工免疫产生的特异抗体，同时也存在弱毒返强的潜在危险，给GP的净化乃至消灭造成一定的困难，而基因疫苗技术为解决此难题提供了一种选择途径。
应用PCR扩增GPV的VP3基因并克隆入pMD 18-T-Simple载体，亚克隆正向插入到真核表达质粒pcDNA3.1（+）CMV启动子下游多克隆位点，经PCR和HindⅢ与BamHⅠ双酶切鉴定表明成功构建了GPV VP3基因疫苗（pcDNA3.1-GPV-VP3）。该疫苗以200 µg/只肌注免疫Balb/c小鼠和鹅，同时分别设肌注PBS和pcDNA3.1（+）作为对照，于免疫后第30、45、60、75、90、105天应用鸭胚原代成纤维细胞（DEF）进行微量中和试验检测小鼠和鹅血清抗100 TCID50GPV的抗体效价。结果表明，pcDNA3.1-GPV-VP3免疫小鼠第30天可检测到抗GPV的中和抗体，抗体效价缓慢上升至90天达到高峰（平均1:135.8）后下降，105天仍高于75天；免疫鹅的中和抗体效价呈现与小鼠类似的规律，但中和抗体效价低于小鼠，第90天达到高峰（平均1:98.5）。因此，pcDNA3.1-GPV-VP3具有良好的免疫原性，肌注免疫小鼠和鹅后能够诱发产生抗GPV的中和抗体，有进一步开展临床研究和应用的前景。
