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鸭甲肝病毒VP1-ELISA的建立

热度15票浏览31次【共0条评论】【我要评论】时间：2010年8月10日 15:26

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中和试验是检测鸭甲肝病毒（duck hepatitis A virus，DHAV）抗体的经典方法，但该法费时费力，不适合检测大量的血清样品。为建立快速的血清学诊断方法，开展了本研究。中国水禽网"I0Q3h6G9d8x8G0z8}d

选DHAV VP1基因的合适区域构建原核表达载体pET-32a-VP1，经IPTG诱导表达出40 kD的重组蛋白，Western Blot验证了重组蛋白的特异性。以纯化的VP1重组蛋白为包被抗原，以DHAV强毒株感染后的康复鸭血清为阳性血清，从未发生过鸭病毒性肝炎且未免疫过鸭肝炎疫苗的鸭场采集血清作为阴性血清，经方阵滴定确定了抗原包被量及包被条件、封闭液及封闭条件、待检鸭血清及二抗的稀释度、各步骤的反应时间等。用该法检测其他常见病原的抗血清，未见交叉反应，结果表明，所建立的方法具有较好的特异性。