聚丙烯酰胺凝胶电泳的一种辅助辨型方法
本研究旨在介绍笔者在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳试验遇到难以区分的条带时所获得的一些经验,并由此提出完善此类试验的一点建议。试验将难以区分的条带样品做成混合样Marker来辅助辨型,通过调整电压和凝胶浓度来达到区分条带的目的。为了能直观的阐述本试验有关混合样Marker的使用方法及其优势,取用鸭微卫星引物APL515893,选用此引物扩增效果好、多态性丰富的6个鸭的基因组DNA作为模板,取适量混匀作为混合样DNA,作为第一批混合样。PCR结束后,从产物中取样作为第二批混合样。配制聚丙烯酰胺凝胶,取两批次的混合样点样,电泳,银染。分别采用两个不同浓度的聚丙烯酰胺凝胶和两个不同电压进行上述试验。
研究结果发现,当带型相似时,可以分别根据其非特异性条带进行大致的判断。当然,这只是经验性的判断,并不能说明所有的非特异性条带不同,其主带就不同。但如果已经做了混合样Marker分析,知道是不同的两条带,就可以依据非特异性条带对其他拥有同样主带和相同/不同非特异性条带的个体进行辨别区分,以节省时间,减少工作量。用该方案可以将相差0~3 bp大小的条带区分开来。
