PCR技术检测肉中食源性病原菌的研究进展
彭祥伟 研究员 汪学荣
目前，PCR技术在检测肉中食源性病原菌方面得到广泛应用。吴家林等（2009）以肠出血性大肠杆菌O157:H7的stx1、stx2、hly和rfbE基因为靶基因，设计4对引物，在同一扩增体系中，优化扩增出四条片段，并进行了猪肉模拟样品的检测，结果显示：猪肉模拟样品30℃预增菌4h后检测灵敏度达到100cfu/mL，其特异性和灵敏度均较高。丁孟建等（2009）对肉鸡源肠炎沙门氏菌的进行了分离、鉴定和生物学特性观察，利用SS营养琼脂平板分离，经生化和PCR鉴定出26株肠炎沙门氏菌，分离菌株能将试验鸡鸭及小鼠致死，并能复制出与临床表现一致的病例。范放等（2009）在传统标准方法基础上，与实时荧光PCR检测技术相结合，建立了一种冷冻肉类简便、快速、灵敏和准确的沙门氏菌检测方法，应用于检验进口冷冻畜禽肉样品3177份，检出沙门氏菌样品105份。陈伟等（2009）以污染志贺氏菌的猪肉为原料，比较了沸水浴法、裂解液煮沸法、CTAB/SDS法和改良的碱性异硫氰酸胍法四种提取方法对志贺氏菌DNA的提取效果，并以提取的DNA为模板进行PCR检测，结果表明改良的碱性异硫氰酸胍法提取志贺氏菌DNA的效果较好，猪肉中志贺氏菌的PCR最低检出限为5cfu/g，检测时间少于8h。
在同一PCR管中加入多种病原菌的特异性引物，可同时检测多种病原菌。杨小鹃等（2008）[15]分别针对沙门氏菌侵袭基因invA、大肠杆菌O157抗原基因rfbE建立了多重PCR检测的方法，可简便、快速、灵敏地实现畜禽肉中沙门氏菌和大肠杆菌O157的同时检测。郑秋月（2009）申请了“肉制品中布氏菌检测试剂盒及检测方法”的专利（CN101570780），本发明的试剂盒及检测方法，可检测肉制品中布氏菌属6种布鲁氏菌，并进行6种布鲁氏菌的分种检测。本试剂盒特异性强，灵敏度高，可以检测到布鲁氏菌19 CFU/mL。操作快捷、简便，且检测成本低。
摘自《国家水禽产业技术体系工作简报》
